20. 1. 2020  12:46 Dalibor
Akademický informační systém

Lidé na STU


Na této stránce máte zobrazeny všechny veřejně přístupné údaje o zadané osobě. Některé informace o personálním zařazení a funkcích osoby mohou být skryty.

Ing. Viera Illeová, PhD.
Identifikační číslo: 3981
Univerzitní e-mail: viera.illeova [at] stuba.sk
 
Vedecká pracovnice KS IIa. CSc.,PhD. - Oddelenie chemického a biochemického inžinierstva (ÚCHEI FCHPT)

Kontakty     Výuka     Publikace     Orgány     Vedené práce     

Základní informace

Základní informace o závěrečné práci

Typ práce: Diplomová práce
Název práce:Comparative expression analysis for whole-cell production of cellobiose
Autor: Ing. Hana Dobiašová
Pracoviště: Oddelenie chemického a biochemického inžinierstva (ÚCHEI FCHPT)
Vedoucí práce: Ing. Viera Illeová, PhD.
Oponent:Dr. Dipl.-Ing. Christiane Luley
Stav závěrečné práce:Závěrečná práce byla úspěšně obhájena


Doplňující informace

Následují doplňující informace závěrečné práce. Kliknutím na odkaz s názvem jazyka zvolíte, v jakém jazyce mají být informace zobrazeny.

Jazyk zpracování závěrečné práce:anglický jazyk

slovenský jazyk        anglický jazyk

Název práce:Comparative expression analysis for whole-cell production of cellobiose
Abstrakt:The aim of this master thesis was to compare 14 different expression constructs (plasmids) for cellobiose synthesis. Analysis was performed at several levels i) stability of constructs carrying the bom site (basis of mobility) to the constructs without the bom ii) expression performance of the pBICI plasmids containing the ribosomal binding sites of different binding strength iii) expression performance of the pDUAL constructs regarding the various promoters (lacZ, tacI, T5 and T7) iv) conversion performance of cell-free extracts and whole-cells in cellobiose synthesis; mostly focused on synthesis via whole-cells. According to the results, the plasmid stability was not obtained by the bom site regarding several expression cycles. However, the expression performance was increased in comparison to the constructs without bom site (the increase of the expression performance due to bom site: 94% pBICI_weak; 83% pBICI_med; 99% pBICI_strong and 96% pDUAL_lacZ). Moreover, some constructs without bom site did not give viable transformants (pDUAL_tacI; pDUAL_T5; pDUAL_BAD). The best expression performance was achieved with pBICI_strong +bom with an average activity of cellobiose phosphorylase (CuCBP) of 1.16 ± 0.19 U mg-1 total protein and sucrose phosphorylase (BaSP) of 9.69 ± 2.38 U mg-1 total protein (biological replicates); (the activity of CuCBP was measured in the production of glucose-1-phosphate). Among the pDUAL constructs the protein production was best for pDUAL_tacI +bom whereas for the rest of the pDUAL plasmids the expression was highly variable through several expression cycles. The average activities of pDUAL_tacI +bom were 3.16 ± 0.67 U mg-1 total protein for CuCBP and 4.61 ± 0.50 U mg-1 total protein for BaSP (biological replicates). Cellobiose production was most efficient with pBICI_strong +bom (90% yield of cellobiose after 10h). Cellobiose synthesis is limited by the first step in the cascade reaction catalysed by BaSP. Therefore, BaSP activity must be in excess in comparison to CuCBP activity to obtain a high cellobiose production rate. Finally, cellobiose synthesis was performed using either whole cells or the corresponding cell-free extracts. It was observed that semi-permeabilized whole cells (one freezing step) show a similar reaction time course as the cell-free extracts. This fact allows a simplified production procedure in terms of future large-scale application in industry.
Klíčová slova:Ribosomal binding site, Cellobiose synthesis, Cellobiose phosphorylase, Sucrose phosphorylase, Promoter, pDUAL, pBICI, Whole cells, Cell-free extract

Zobrazení a stahování souborů

Pokud chcete zobrazit zadání závěrečné práce, klikněte na ikonu Zobrazit zadání. Ikony Závěrečná práce, Přílohy práce, Posudek vedoucího a Posudek oponenta představují soubory týkající se závěrečné práce, které je možné stáhnout. Budou zobrazeny pouze v případě, že je soubor vložen a zároveň je veřejný.

Zobrazit zadání

Části práce s odloženým zveřejněním:

Závěrečná práce (přílohy závěrečné práce) neomezeně
Posudky závěrečné práce neomezeně